Je n’ai pas bien compris l’expérience de Pulse-Chase. Pourriez vous me le réexpliquez s'il vous plait ? Merci !
Quelle différence y a t 'il entre cette expérience et l’autoradiographie ?
Le mot "pulse" est un mot anglais qui signifie "rythme / pouls (battement du coeur) / pulsation", et "chase" veut dire "pourchasser, poursuivre" ou encore "graver". Quel est le rapport de ces deux mots avec notre expérience ?
Salut, effectivement la différence entre ces deux expériences peu paraître flou les premières fois qu'on en parle.
Les deux expériences utilisent la radiographie pour éclairer des protéines ou organites d'intérêts dans la cellule.
La différence étant que, dans l'autoradiographie, la cellule est tuée après avoir subit les rayonnements. On a donc une image fixe de la cellule, elle est morte, comme les cellules fixées lors de la microscopie. On ne peut donc pas étudier le mouvement des organites ou des protéines dans la cellule, mais juste leur position et leur répartition à un instant donné.
A l'inverse, pour le pulse-chase, on envoit pendant un très court instant un isotope radioactif ou un rayonnement, ainsi, les protéines produites durant ce laps de temps seront radioactives et seront visible en microscopie (c'est le pulse une pulsation de radioactivité pendant un court instant). La cellule reste vivante, on peut donc faire de la vidéomiscroscopie, et étudier le déplacement du groupe de protéines radioactives dans le temps (les autres protéines créées ne se verront pas dans les images car non radioactives), un petit amas radioactif est observable sur les images. (c'est le chase, on "chasse" ou suit si tu préfères, le groupe de protéines marqués dans la cellule.
A quoi ça sert du coup ?
L'autoradiographie permettra d'avoir une image normale comme si tu utilisais la fluorescence ou l'immunohistochimie. C'est une technique pour marquer un élément d'intérêt dans la cellule (l'adn par exemple).
Le pulse-chase lui permet d'avoir des informations sur le chemin que prend une protéine d'intérêt dans la cellule, de sa création dans le noyau jusqu'à son utilisation ou sa sécrétion.
PS: ces deux expériences sont typiquement des parties du cours pour lesquelles tu ne pourras quasiment pas avoir des questions de par coeur ou de cours dessus, mais qui pourront donner lieu à des exercices. Comprendre ces expériences te permettra de comprendre plus facilement les exercices, et surtout de ne pas tomber dans les pièges (ex: on étudie la dynamique cellulaire au moyen de l'autoradiographie : FAUX car les cellules sont mortes dans l'autoradiographie.)
Modifié en dernier par Gregouz le 30 août 2020, 17:37, modifié 1 fois.
Pardon de te déranger encore.
Mais je voudrais savoir comment doit on interpreter les résultats d'une expérience de Pulse Chase, comme dans l'exercice suivant ? Comment cela se lit il ?
Pourquoi (dans mon exercice) il y t'il des cellules de contrôles et des cellules témoins ?
D'après ce que j'ai compris, on veut déterminer le moment de la synthèse de la sucrase- isomaltase qui est atteint par l’infection par le rotavirus RRV. On cherche alors à voir à quelle étape de la synthèse de la sucrase-isomaltase est altérée. Nous allons donc comparer les différentes étape de sa synthèse dans une cellule infectée, avec cette même synthèse dans une cellule saine. C'est ca ?
pulse chase.png
Encore merci de ton attention,
Encore une petite chose...
Gregouz a écrit : ↑30 août 2020, 15:14
on "chasse" ou suit si tu préfères, le groupe de cellules marqués dans la cellule.
Le groupe de protéines marqués dans la cellule plutot, non ?
Vous n’avez pas les permissions nécessaires pour voir les fichiers joints à ce message.
N'oublie pas de poster la description de l'exercice qui va avec le document, on ne peut pas analyser un document seul .
Sinon, comme je t'ai répondu dans ton autre sujet, oui le contrôle représente les conditions normales avec lesquelles on va comparer les conditions de la cellule malade. Ici, on dose la quantité de protéine et on a aussi des informations sur son poids moléculaire (plus elle va loin, plus elle est légère) à différent temps de la chase.
Effectivement, cela permet de suivre les différentes étapes de synthèse (on voit que la protéine qui fait au départ 200kDa va au fur et à mesure de la chase passer à 210 kDa). En comparant les données du contrôle à celles de la cellule malade, on ne voit aucune différence significative entre la cellule contrôle et RRV. Le rotavirus n'a donc aucun effet sur la synthèse de la sucrase-isomaltase (il a sûrement un effet plus tard, sur sa destruction).
Merci de ta réponse.
Pour le pulse chase, nous devons, comme tu l'as dit "avoir des informations sur le chemin que prend une protéine d'intérêt dans la cellule, de sa création dans le noyau jusqu'à son utilisation ou sa sécrétion". On obtiens donc une sorte d'itinéraire... Ce n'est pas le cas du graphique de la pièce jointe ? Pourquoi ?
Merci beaucoup de ton aide !
(cet exercice et celui de mon autre sujet est le même, je vais mettre l'énoncé complet si tu le veux)
Non, ce que tu regardes est le résultat d'une chromatographie SDS-PAGE à différent moment de la chase. Mais tu n'as pas le détail de l'expérience pulse-chase. On te parle de l'expérience pulse-chase juste pour te dire qu'il y a une chronologie entre les échantillons et qu'on étudie la synthèse de la protéine.
Je me permet de répondre. La technique utilisée ici pour obtenir le résultat dans la figure A est ce qu'on appelle un SDS-Page.
Le SDS-Page vous allez le revoir précisément en biochimie mais le principe est assez simple.
Le SDS c'est un agent dénaturant qui rend une protéine négative. Ensuite on va faire une électrophorèse. En gros on va placer nos éléments à étudier au niveau d'une cathode chargée - puis les protéines chargées négativement vont migrer vers la cathode + (le moins est attiré par le plus, ce n'est pas un secret).
Les protéines migrent à travers un gel qui possède des sortes de mailles, un peu comme des tamis à la suite. Donc les grosses protéines n'arrivent pas à passer très loin dans les mailles du filet donc elle reste relativement proche du départ (elles ont un poids moléculaire PM élevé). En revanche les protéines légères migrent plus loin car elles ont un PM léger.
Ainsi tu peux comparer la migration et les PM pour déterminer si il y a une différence entre une situation témoin et une situation expérimentale.
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ÇaRame a écrit : ↑30 août 2020, 19:15
Les protéines migrent à travers un gel qui possède des sortes de mailles, un peu comme des tamis à la suite. Donc les grosses protéines n'arrivent pas à passer très loin dans les mailles du filet donc elle reste relativement proche du départ (elles ont un poids moléculaire PM élevé).
J'ai fait des recherches sur le Western Blot. Sommes nous d'accord que ce système de maille est également présent avec un Western Blot ?
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