Expérience Pulse Chase

[ÇaRame]

Oui absolument. Ici la figure A c'est ce qu'on appelle un Western Blot.

[Haterind]

Merci de ta réponse !

Les protéines migrent à travers un gel qui possède des sortes de mailles, un peu comme des tamis à la suite. Donc les grosses protéines n'arrivent pas à passer très loin dans les mailles du filet donc elle reste relativement proche du départ (elles ont un poids moléculaire PM élevé).

J'ai fait des recherches sur le Western Blot. Sommes nous d'accord que ce système de maille est également présent avec un Western Blot ?

Dis toi que comme l'a rappelé CaRame, le SDS c'est juste une molécule pour charger négativement et donc déstructurer ta protéine.
Mais seul, c'est pas très utile, donc tu l'accompagne forcément d'une électrophorèse (ou PAGE) pour pourvoir tout séparer, et le Western Blot en est un exemple

Ton ensemble va former ton SDS-PAGE que tu as dans le document!

[le.roi.singe]

Oui absolument. Ici la figure A c'est ce qu'on appelle un Western Blot.

Ouuuuu mais alors...concrètement comment peut on faire un Western Blot et une Pulse Chase "à la suite" ?
Je me renseigne car je suis curieux... mais j'ai bien compris l'exercice sinon, grace à Gregouz !

[ÇaRame]

En fait ce qu'on appelle le pulse chase c'est juste rendre un élément radioactif et le suivre pendant plusieurs heures. Mais pour observer les résultats, on utilise différentes techniques de traçage de la radioactivité ou encore la technique de SDS-Page pour mettre en évidence des différences de poids moléculaire.
Ces différentes techniques donnent des Western Blot. Le Western Blot, il y a plusieurs manières de l'obtenir mais tout ce que tu as à retenir c'est reconnaître un western blot et savoir le lire. On ne te demandera pas comment on l'obtient dans les détails.

[le.roi.singe]

[...] tout ce que tu as à retenir c'est reconnaître un western blot et savoir le lire. On ne te demandera pas comment on l'obtient dans les détails.

Alors peut tu me dire s'il te plait si ma lecture du blot est correcte ?
(En haut, d'après mes recherches, c'est les 3 infos qu'on obtient avec un blot.)

(PJ supprimée pour libérer de l'espace de stockage ! )

Où est indiqué l'intensité ?

Merci de ton attention et de ton aide !

[ÇaRame]

Déjà tu as bien compris que C c'est les cellules témoins, c'est une bonne chose!
On observe donc plusieurs situations à des heures de chase différentes. Les bandes sont plus ou moins hautes en fonction du poids moléculaire. Plus elles sont lourdes, plus elles sont hautes. Et plus elles sont légères, plus elles sont basses. (tu vois ça en fonction de la légende à droite : le 210 kDa et le 200 kDa).
L'intensité des bandes c'est tout simplement leur épaisseur. On considère que l'expérience est identique à contrôle quand les bandes sont de même épaisseur et sont au même niveau (donc même PM).

[Alpha Chris]

Merci de ta réponse !

Les protéines migrent à travers un gel qui possède des sortes de mailles, un peu comme des tamis à la suite. Donc les grosses protéines n'arrivent pas à passer très loin dans les mailles du filet donc elle reste relativement proche du départ (elles ont un poids moléculaire PM élevé).

J'ai fait des recherches sur le Western Blot. Sommes nous d'accord que ce système de maille est également présent avec un Western Blot ?

Salut!
Oui, exactement, le western blot est une méthode d'identification des protéines qui nécessite l'utilisation de gel de polyacrylamide.

[le.roi.singe]

Merci, ca m'aide beaucoup.

(est ce que je peux supprimer la PJ, pour les problèmes d'espaces de stockages ... ?)

[Alpha Chris]

Merci, ca m'aide beaucoup.

(est ce que je peux supprimer la PJ, pour les problèmes d'espaces de stockages ... ?)

Je t'en prie. Si tu as d'autres questions n'hésites pas. Et pour la PJ, tu peux édit ton message comme tu le souhaites du moment que la question reste compréhensible, ne t'en fais pas ^^

[le.roi.singe]

Salut tout le monde !

Je reprends mon ancien sujet.
Nous avions parlé de l'expérience de Pulse Chase ici, plus du Western Blot. Mais y a t il une électrophorèse dans un Western Blot ? Serait ce l'étape qui consiste à transférons les protéines sur une membrane en cellulose grâce à un courant électrique ?

Merci de votre attention !