Concernant la chromatographie d’affinité pour isoler la Chymotripsine, je ne suis pas certaine d’avoir bien compris ce que m’apporte, à ce stade de la réaction le test colorimetrique...
Ce que je crois avoir compris :
- apres avoir elué les protéines qui ne réagissent pas avec l’inhibiteur, il me reste uniquement, fixé sur les billes, la Chymotripsine apriori purifiée.
Donc, j’ajoute mon tampon d’elution et je récupère ma Chymotripsine. Ce tampon d’élution va dissocier la Chymotripsine de son inhibiteur.
Donc, si je test en colorimétrie :
1. J’ai une réaction colorée : mon enzyme est dans mon tube et elle n’interagit pas avec son inhibiteur
2. Pas de réaction colorée : mon enzyme n’est pas dans le tube.
Est-il aussi possible que mon enzyme soit aussi dans mon tube, mais qu’elle soit inhibée ?
Pour tester si mon échantillon c’est bien fixé à l’inhibiteur, en mettant le substrat sur l’ensemble « bille + Inhibiteur (ligand) + enzyme » je cherche à NE PAS observer de réaction colorée ?
Désolée si je ne suis pas très claire, j’avoue que c’est pas hyper clair dans ma tête.
Je comprend l’idée, mais j’ai l’impression que quelque chose m’échappe sans comprendre quoi...
Merci d’avance
