Salut,
titirob a écrit :Quand on utilise l'immunofluorescence, la cellule est-elle morte ou vivante après la perméabilisation?
Morte. La permeabilisation tue la cellule.
Éventuellement, si l'antigène que l'on veut observer est à la surface de la cellule, la cellule sera vivante car à ce moment-là, il n'y a pas besoin de perméabiliser la membrane pour faire rentrer l'anticorps dans la cellule, puisqu'on ne veut pas le faire rentrer dans la cellule dans ce cas précis.
titirob a écrit :Et permet-elle du coup d'étudier la dynamique cellulaire ?
Non. La cellule est morte.
Et si on reste à la surface de la cellule, sur une cellule vivante donc: bah non, non plus, puisqu'alors on n'a pas fait fluorescer le dedans de la cellule, et la dynamique cellulaire, elle est dans la cellule.
titirob a écrit :Je sais qu'il n'est pas toujours nécessaire de la perméabiliser qd la protéine est en surface
Pas toujours ? Jamais en fait. Parce que là ça sert à rien.
titirob a écrit :mais quand il faut introduire des anticorps, est-ce que ça tue ?
Donc oui c'est toujours le cas, puisqu'on perméabilise la membrane.
titirob a écrit :introduire via des liposomes ne tuaient pas et une autre qui disaient que la perméabilisation tue tout la tps...
En fait, dans le liposome, tu mets un vecteur (molécule d'ADN), et sur ce vecteur tu rajoutes:
- le gène de la protéine d'intérêt que tu veux regarder dans la cellule,
- un gène qui code pour une protéine fluorescente (et non pas un anticorps lié a un fluorochrome),
- un promoteur pour initier la transcription de l'ensemble
-> qui in fine donnera une protéine d'intérêt hybride fluorescente (que tu vas pouvoir observer dans ta cellule vivante), parce que l'ADN s'est intégré au génome du noyau de la cellule, où il y aura donc une transcription en ARNm qui donnera après traduction une protéine fluorescente.
Et la cellule est vivante parce que pour faire rentrer un liposome, on ne permeabilise pas la membrane (la membrane plasmique du liposome fusionne tout simplement avec celle de la cellule, genre comme une vésicule).
Le vecteur d'ADN (alors au fait, son petit nom c'est plasmide), on peut le faire rentrer autrement que par un liposome dans la cellule. Il y a deux autres techniques, qui elles aussi ne tuent pas la cellule:
-micro-injection par micro-pipette;
-electroporation par choc électrique transitoire sur la membrane plasmique.
Bon courage
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