Fixation de la cellule

[degi95]

Bonjour, qu'est ce qu'il se passe avec la cellule lorsqu'on la fixe svp?
Que peut on detecter ou observer?

Si j'ai bien compris c'est le fait de tuer la cellule de façon à ce qu'elle ressemble le plus à une cellule vivante. Suis je bien informer? Sinon je vous prie de bien m'éclairer sur le sujet.
Peut on analyser les composants d'une cellule vivante (sans la tuer)? (peut être une question bête mais il faut que je le sache )

Aussi je pige pas totalement la technique d'électrophorèse..Quelqu'un pourrait m'aider?

Mille merci!

[LeoKast]

Salut, lorsqu'on fixe une cellule, on la tue ! On la perméabilise éventuellement afin d'utiliser les anticorps qui iront se fixer à des éléments intracellulaires et de les détecter.
On peut bien sûr analyser les composants d'une cellule vivante sans la tuer en la rendant radioactive (elle va incorporer de façon naturelle des éléments radioactifs) par exemple. Ou encore en faisant de la culture cellulaire on peut voir ce qu'elle sécrète cependant la plupart du temps il faudra la fixer.

Concernant l'électrophorèse SDS PAGE rien de bien compliqué en fait le plus souvent quand on veut analyser une protéine càd connaitre son poids moléculaire, éventuellement sa structure (sous unité) on utilise électrophorèse SDS PAGE: On isole la protéine de l'homogénat cellulaire on la place dans des cuves apres traitement avec du SDS et on la fait migrer une un gel polyacrylamide. Le SDS est un agent qui coupe les liaisons faibles et qui ajoutent des charges négatives. Au moyen d'un champ électrique les sous unités chargées négativement ont tendance à migrer vers le bas (voir schéma) les monomères les moins lourdes migreront le plus loin. On dit qu'on les sépare en fonction de leur taille. Et enfin on utilise la technique d'immunofluorescence pour mettre en évidence les bandes.
ça s'appelle un Western Blot.

J'ai essayé d'être le plus clair possible mais par écrit ce n'est pas évident. Bon courage

[Jbrd]

Bonsoir,

mais pourtant en microscopie optique on doit quand même fixer la cellule (d'après le Tut'histo) et pourtant il est dit qu'on peut observer des cellules vivantes en microscopie optique.
On peut fixer sans tuer ? les agents chimiques sont quand même "forts"

[kentinab]

Si elles sont fixés elle ne sont plus vivantes.

La microscopie optique peut observer des cellules vivantes mais la quasi totalité du temps on regarde une coupe histologique fixée pour avoir les infos qu on veut.

Dans le cas où on observe des cellules vivantes pour voir les mouvements de protéine grâce à une gfp, les cellules ne sont pas fixées par exemple.

[Jbrd]

D'accord merci !

[degi95]

Salut, lorsqu'on fixe une cellule, on la tue ! On la perméabilise éventuellement afin d'utiliser les anticorps qui iront se fixer à des éléments intracellulaires et de les détecter.
On peut bien sûr analyser les composants d'une cellule vivante sans la tuer en la rendant radioactive (elle va incorporer de façon naturelle des éléments radioactifs) par exemple. Ou encore en faisant de la culture cellulaire on peut voir ce qu'elle sécrète cependant la plupart du temps il faudra la fixer.

Concernant l'électrophorèse SDS PAGE rien de bien compliqué en fait le plus souvent quand on veut analyser une protéine càd connaitre son poids moléculaire, éventuellement sa structure (sous unité) on utilise électrophorèse SDS PAGE: On isole la protéine de l'homogénat cellulaire on la place dans des cuves apres traitement avec du SDS et on la fait migrer une un gel polyacrylamide. Le SDS est un agent qui coupe les liaisons faibles et qui ajoutent des charges négatives. Au moyen d'un champ électrique les sous unités chargées négativement ont tendance à migrer vers le bas (voir schéma) les monomères les moins lourdes migreront le plus loin. On dit qu'on les sépare en fonction de leur taille. Et enfin on utilise la technique d'immunofluorescence pour mettre en évidence les bandes.
ça s'appelle un Western Blot.

J'ai essayé d'être le plus clair possible mais par écrit ce n'est pas évident. Bon courage

Ah oui tout devient claire à présent. Merci beaucoup pour ton aide!