pcr amorce et ponts disulfures

[m''']

bonsoir,
l’amorce d’une pcr elle peut se faire à partir d’une séquence d’introns ?
et quand on traite des protéines au bêta mercapto éthanol ça casse seulement les ponts disulfures intercatenaires ou intracatenaires aussi, parce qu’il me semble qu’on ne prenait pas en compte celle intra
merci d’avance

[idriss]

Bonjour,

Non, une amorce de PCR n'est jamais extraite d'un intron si elle est obtenue à partir de l'ADNc (qui ne possède pas de séquence intronique)! mais si la PCR est réalisé sur l'ADN alors elle peut contenir les séquences introniques).

En ce s'agit du beta mercaptoéthanol, il permet de briser TOUT les ponts disulfures qu'ils soit intra ou inter caténaires!!!

Bonne journée!

[EstherR]

Bonjour,
Je me permets : une amorce de PCR peut être intronique puisque la PCR peut se faire à partir d'ADN nucléaire comme d'ADNc. Si on amplifie de l'ADNc, effectivement on aura uniquement des séquences exoniques, mais s'il s'agit d'ADN nucléaire, ça peut être n'importe quelle séquence (promoteur, intron, exon…).

[Waleedh]

Bonjour,

Concernant les ponts dissulfures, qu'est ce que l'on doit envisager lorsuq'une proteine porte un pont INTRA et qu'une autre porte un pont INTER? 2 S-S peuvent-elle etre reliés par un pont INTRA ou bien entre 2 S-S se sera toujours un pont INTER?
Je pensais que lorsqu'une proteine portais un pont intra-catenaire, on n'en tenais pas en compte car c'est un pont "dans la meme s-s donc si elle se casse, sa ne changerai rien..." Mais je pense que ducoup c'est faux et j'ai une grosse confusion maintenant.

Merci beaucoup

[idriss]

Bonjour,

Un pont disulfure est une liaison (pont) qui lie deux souffres (disulfure).
Donc un S-S est un pont disulfure.

Un S-S est dit intra caténaire lorsque les 2 S appartiennent au même catena (intra caténaire) donc ils font partie de la même sous unité protéique.

En revanche, un S-S est dit inter caténaire lorsque les 2 S appartiennent à deux catenas différents, donc ils font partie de la deux sous unités protéiques différents.

L'appartenance des S à un même catena ou des catenaas différents vas modifier la manière dont le complexe protéique sera affecté par leurs scission.



J'espère que cela t'as aidé!

[Waleedh]

Ah je vois mieux merci Idriss, mais pour bien eclaircir un dernier doute, si une sous-unité faisant 50 KDa possede un pont disulfure Intra-catenaire, lorsque l'on rajoute du B-mercapto ethanol on n'obtiendra pas une division en 2 de cette sous-unité, c'est juste elle aura prise une autre conformation c'est sa?

Ps: La structure primaire elle permet de determiner la structure 3D d'une proteine mais est ce que la structure secondaire permet elle aussi sa?

[idriss]

En effet,
Vu que le beta mercaptoéthanol va briser le pont disulfure S-S, celui-ci ne pourra plus garder la sous unité fermée, cependant la sous unité est quand même retenue par les liaisons peptidiques planes, polaires et rigide, donc même en absence du S-S ton catena reste soudé et tu gardera une sous unité de 50kDa entière.

Ps: en ce qui s'agit des structures primaire, secondaire tertiaires... la structure primaire détermine la structure secondaire du catena, l'enchainement de différentes structures secondaires va déterminer la structure en 3D du catena...