Coucou !
Dans la chromatographie échangeuse d'ions, l'elution peut être faite de deux manières :
- gradient de pH
- gradient de forces ioniques
Pour le gradient de pH tu as tes molécules fixées sur la colonne. On prend l'exemple de la chromatographie à échangeuse d'ANIONS. La colonne est chargée positivement et les acides aminés négatifs vont s'y coller alors que les positifs ne vont pas se coller. Pour récupérer les anions tu dois couper les interactions entre les anions et la colonne. Pour couper l'interaction électrostatique, tu vas changer la charge globale de l'acide aminé (ce qui est possible car l'AA a une charge différente selon le pH). Pour que ton anion devienne un cation il faut donc le mettre dans un milieu acide donc tu vas diminuer le pH progressivement. Les premiers anions à se détacher de la colonne seront ceux avec le pKa le plus élevé. Et plus ton pH devient acide plus tu vas détacher les acides aminés. Au contraire dans la chromatographie échangeuse de CATIONS tu vas devoir rendre les cations négatifs pour couper l'interaction avec la colonne négative. Donc tu vas augmenter le pH pour avoir des acides aminés sous forme basique.
Pour l'elution par gradient de forces ioniques c'est différent. On apporte beaucoup de sels comme le Na Cl qui vont apporter beaucoup de charges positives et négatives pour créer un phénomène de compétition.
Par exemple si ta colonne est positive avec des acides aminés négatifs collés dessus:
- le Na+ va apporter beaucoup de + qui vont interagir massivement avec les anions. Du coup les anions vont interagir beaucoup plus avec le Na+ et beaucoup moins avec la colonne
- le Cl- va apporter beaucoup de charges - qui vont interagir avec la colonne massivement. Du coup il y aura moins de place sur la colonne pour les anions.
La somme des deux fait que les anions vont se décrocher.
J'espère que ça répond à ta question, dis moi si tu as besoin de précisions !
Re: chromatographie échangeuse d'ions
