[outils d'étude] autoradiographie

[Nat'-4]

Coucou
J'ai une question sur la technique de pulse chasse, je ne comprends pas pourquoi on fournit une quantité de précurseur non radioactif à la cellule pendant la période de chasse si c'est pour s'intéresser à la synthèse du précurseur RADIOACTIF. Autrement dit, en quoi la chasse nous aide à observer la substance marquée préalablement grâce au précurseur radioactif (donc ce qui s'est passé pendant le pulse) ?
J'espères que ma questions est claire.
merci d'avance

[jbourne]

C'est parceque c'est pendant le pulse que l'on fournit les précurseurs radioactifs.... pendant la période de chasse on lave le milieu de tous les précurseurs radiomarqués

[Nat'-4]

D'accord, mais après le lavage, pourquoi on rajoute des précurseurs non radioactifs ? ce que j'ai du mal à comprendre c'est que : si on veut regarder le déplacement de telle substance, on fait un marquage radioactif de cette substance puis on observe par autoradiographie (ou autre technique d'observation) mais pourquoi on rajoute la même substance NON marquée ? la substance marquée nous suffit pour pouvoir observer non ?

[Mystic]

Bonsoir,

J'espère réussir à te faire comprendre.
Alors, le but de cette technique, c'est de suivre le chemin que va faire une molécule.
Le principe de cette méthode là est d'injecter un produit radioactif qui va imiter cette molécule et donc avoir le même parcours à l'intérieur de la cellule.
Seulement, si tu mets que du produits radioactif, tu vas avoir une sorte de nuage dans ta cellule. La progression ne va pas être bien claire. En effet, dans la cellule tout (ou presque) est synthétisé en permanence. Donc tu vas avoir d'autres molécules radioactives qui vont être synthétisées. Au final, sans chasse, tu visualiserais les molécules au niveau de la synthèse, ET un peu plus loin dans la cellule, ET encore un peu plus loin etc...
Avec la chasse, tu vas injecter ce même produit non radioactif pour qu'il suive le même chemin et prenne la place du radioactif. Ainsi, tu vas "laver" ta cellule et les nouvelles molécules synthétisées ne vont plus être radioactives. Par conséquent, tu vas pouvoir observer un chemin clair et précis. Uniquement l'endroit de la synthèse PUIS un peu plus loin Puis encore un peu plus loin. Tu ne vas pas visualiser tous les endroits en même temps, mais les uns après les autres puisque tous ne seront pas radioactifs en même temps. La chasse "pousse" en quelque sorte toute la radioactivité dans un coin de sorte que tu ne visualises pas un nuage ou amas.

Voilà

[Nat'-4]

Ah D'accord c'est pour ça ! j'ai enfin compris! Merci beaucoup Mystic !

[Halounette]

Bonjour,

Je me suis un peu embrouillée avec le pulse-chase:

A l'étape du chase on observe la cellule à plusieurs moments.
Or on l'observe par autoradiographie donc au MET => la cellule est fixée => son activité est "bloquée".

Où est-ce que j'ai faux ? ._.

[DDJ]

Bonjour,

Autoradiographie = Plaque photo sous la cellule qui enregistre les endroits où il y'a une molécule marquée radioactivement.
Ce qu'on observe, c'est la plaque photo en MET, pas la cellule. => Cellule n'est donc pas fixée.

Après, on obtient que des points et pas la forme de la cellule, mais on peut supposer que la molécule étudiée est présente un peu partout dans la cellule, ce qui fait que les points donnent la forme de la cellule.

Voila !

[Halounette]

Bonjour,

Autoradiographie = Plaque photo sous la cellule qui enregistre les endroits où il y'a une molécule marquée radioactivement.
Ce qu'on observe, c'est la plaque photo en MET, pas la cellule. => Cellule n'est donc pas fixée.

Après, on obtient que des points et pas la forme de la cellule, mais on peut supposer que la molécule étudiée est présente un peu partout dans la cellule, ce qui fait que les points donnent la forme de la cellule.

Voila !

Mais, elle peut pas être partout si on veut la localiser à un endroit donné...
En plus, sur pas mal de sites je trouve qu'il faut quand même fixer la cellule avant de l'exposer à la plaque de bromure d'argent.

La seule explication serait alors que toutes les cellules de la culture soient synchrones et qu'on en regarde une différente à chaque fois...

[Adriiien]

en fait tu fais ton Pulse sur disons 10 cellules!! ensuite a t=2 min tu prends une cellule tu la fixe et tu regardes ou se situe ta radioactivité (le fait de fixer la cellule permet de bloquer son activité et gelée la cellule). Ensuite tu fixes une deuxieme cellule a t=5min puis une autre a t=10 min puis une autre a t=1h etc etc! et comme ca tu vas pouvoir suivre le devenir des tes precurseurs radiomarqués dans la cellule au differents temps (2min ,5min , 10 min, 1h etc etc)

[Halounette]

en fait tu fais ton Pulse sur disons 10 cellules!! ensuite a t=2 min tu prends une cellule tu la fixe et tu regardes ou se situe ta radioactivité (le fait de fixer la cellule permet de bloquer son activité et gelée la cellule). Ensuite tu fixes une deuxieme cellule a t=5min puis une autre a t=10 min puis une autre a t=1h etc etc! et comme ca tu vas pouvoir suivre le devenir des tes precurseurs radiomarqués dans la cellule au differents temps (2min ,5min , 10 min, 1h etc etc)

D'accord, donc les cellules sont bien synchrones ?!