Salut salut !
Je vais de faire un rappel du cours assez complet, je te met en vert ce qui t'intéresse pour que tu gagnes du temps, le reste c'est du bonus pour la compréhension et ça pourra peut-être répondre à des P1 avant qu'ils ne posent la question xD.
La citoychimie la cellule est morte ou pas ?
Elle est est vivante 
Le but de la fluorescence c'est de pouvoir marquer et donc observer, un ou des éléments précis. Pour se faire on a plusieurs techniques qui vont reposer sur la microcopie photonique (photons, lumière, fluorescence, CQFD).
Les principales techniques sont:
- L'immunocytochimie, dont l'immunofluorescence est l'axe majeur
- La cytochimie
Ton immunocytochimie ça va utiliser un anticorps fluo comme marqueur. Il faut voir ça comme un tir de précision réalisé avec un gros calibre, c'est hyper méga précis mais ça fait beaucoup de dégâts.
Ton Immunoglobuline (= anticorps = Ig) c'est énorme, les pores et canaux membranaires sont trop petits pour qu'ils puissent rentrer (c'est pour ça que les réactions immunitaires se font sur des prots à la surface des cellules). Or ce que l'on veut étudier est à l'intérieur de la cellule, il faut donc ouvrir une brèche dans la membrane pour faire entrer les Ig. Mais on est pas des monstres, on va pas ouvrir une cellule, la laisser se vider de son cytoplasme dans d'atroces souffrances, nan, on la tue d'abord
Nuance importante on FIXE la cellule, c'est à dire qu'on arrête son horloge à un instant t et mais elle garde toute son intégrité (en mode on l'empoisonne comme ça y'a rien de casser dedans plutôt que juste l'écraser avec le pied). Bref une cellule fixée est morte mais une cellule morte n'est pas forcément fixée. Donc on a notre cellule fixée, on peu créer des petits trous (perméabilisation de la membrane) et introduire nos Ig.
Le résultat c'est une photo à un instant t de la localisation de la protéine d’intérêt.
Ta cytochimie ça va utiliser la protéine elle même comme marqueur. C'est un cheminement plus long, car
il va falloir pirater la cellule pour qu'elle produise le marqueur, on est passer d'un tir de précision à de l'infiltration si tu veux un parallèle.
On va utiliser un ADN circulaire (petit bout d'ADN, juste un gène précis) identique à celui codant la protéine d'intérêt, à la seule exception qu'il code également pour un marqueur fluo qui sera donc attaché à la protéine. Tu te doutes bien qu'à partir de là, ta cellule ne doit absolument pas être fixée ! Pour se faire on va soit faire une micro-injection à la cellule (piqûre avec l'ADN circulaire), ce qui à fortement tendance à faire éclater la cellule. Soit une électroporation (choc électrique) qui va perméabiliser transitoirement la membrane, idem ça fait pas mal de dégâts. Soit la transfection, le plus "soft", on met l'ADN circulaire dans un plasmide (sorte de goutte d'huile, comme une membrane cellulaire) qui fusionne avec la membrane.
Bref ta cellule étant vivante elle va intégrer l'ADN circulaire, et commencer à produire la protéine marquée. Le résultat c'est que
tu vas cette fois-ci pouvoir filmer ou du moins faire une chrono-photographie et suivre l'évolution de ta protéine au cours du temps. La cytochimie c'est plus un moyen d'étudier la dynamique cellulaire (or les cellules mortes c'est pas très dynamique)
"Tout ça, pour ça !" tu vas me dire, je sais, mais apparemment c'était pas clair pour tout le monde donc je fais d'une pierre 2 coups
(si j'ai les cours sous les yeux)
) en UE 2 tout particulièrement.
) ex CM Oraux *rire diabolique*