Programme Biocell Cytosquelette

[le.roi.singe]

Coucou,

Dans un exo du tutorat, je trouve ceci

Parmi les propositions suivantes, laquelle (lesquelles) sont exactes ?

On étudie des filaments marqués au GFP (je n'ai pas mis tout l'énoncé).

A. Un microscope électronique ne risque pas de nous aider ici.
B. Les éléments du cytosquelette sont suffisamment grands pour être observés au microscope optique.
C. On a pu utiliser deux anticorps de deux espèces différentes pour étudier nos cellules.
D. Les cellules dont nous disposons sont fixées.
E. Un microscope confocal ne permet pas d’observer des éléments marqués par des fluorochromes.

Réponse ;

A. VRAI. Les cellules sont marqués à l’aide de GFP, il faut donc utiliser un microscope optique.
B. FAUX. Mais en revanche on peut les voir grâce à la fluorescence.
C. FAUX.
D. FAUX.
E. FAUX. Les microscopes confocal font partie des microscopes optiques

- Pour la réponse A, est ce que c'est toujours au programme ?
- Pour la réponse B, pourquoi ?

Merci de votre attention

[Vruiser]

Salut salut,
(oui j'ai vu le topic sur le nocodazole mais petit doute donc j'attend, Lucie te répondra surement demain. Oui je me protège maintenant, une attaque ne fonctionne pas 2 fois sur le même chevalier )

Pour l'item A:
Notion très importante pas que pour la PASS mais pour la suite de tes études dans un domaine scientifique (particulièrement en biomol). La GFP ou Green Fluorescent Protein est genre LA protéine par excellence en marquage par fluorescence, c'est il me semble l'une des première qu'on a découvert et qu'on a su synthétiser, en tout cas y'a eu un Nobel en 2008. Elle est énormément utilisée car il suffit de mettre son gène derrière celui d'une prot d'intérêt, mettre le tout dans un plasmide ou un vecteur viral et bingo t'as juste à brancher un microscope optique pour observer tout ça.
Donc en effet le microscope électronique est pas utile ici pour trouver ta protéine.

Pour l'item B:
Exemple tout bête, tu t'es déjà bouffé un porte vitrée en pensant qu'elle était ouverte ?? pourtant c'est grand, mais tu l'as pas vu. Là c'est pareil, même si on sait où chercher, que c'est assez "grand" dans l'ensemble pour qu'on puisse le repérer, le cytosquelette est transparent. Tu as donc besoin d'un colorant, le mieux c'est d'utiliser un marqueur fluorescent, pour le visualiser. Donc en microscopie optique à fond clair on voit rien mais en microscopie optique à fluorescence c'est nickel.

[le.roi.singe]

Merci de ta réponse !

Pour l'item A:
Notion très importante pas que pour la PASS mais pour la suite de tes études dans un domaine scientifique (particulièrement en biomol). La GFP ou Green Fluorescent Protein est genre LA protéine par excellence en marquage par fluorescence, c'est il me semble l'une des première qu'on a découvert et qu'on a su synthétiser, en tout cas y'a eu un Nobel en 2008. Elle est énormément utilisée car il suffit de mettre son gène derrière celui d'une prot d'intérêt, mettre le tout dans un plasmide ou un vecteur viral et bingo t'as juste à brancher un microscope optique pour observer tout ça.
Donc en effet le microscope électronique est pas utile ici pour trouver ta protéine.

Mais, il n'y a pas ca dans les fiches de la fac, (les polys du SPR), et les cours en amphi, si je ne me trompe pas. Je ne connais que le DAPI, la fluorescéine et la rhodamine....

Pour l'item B:
Exemple tout bête, tu t'es déjà bouffé un porte vitrée en pensant qu'elle était ouverte ?? pourtant c'est grand, mais tu l'as pas vu. Là c'est pareil, même si on sait où chercher, que c'est assez "grand" dans l'ensemble pour qu'on puisse le repérer, le cytosquelette est transparent. Tu as donc besoin d'un colorant, le mieux c'est d'utiliser un marqueur fluorescent, pour le visualiser. Donc en microscopie optique à fond clair on voit rien mais en microscopie optique à fluorescence c'est nickel.

Ah d'accord, l'énoncé demandait si on pouvait utiliser un microscope optique. Les microscopes optiques à fluorescences sont des microscopes optiques (mais l'inverse n'est pas vrai)... un peu ambigue non ?

[Markgraf]

Mais, il n'y a pas ca dans les fiches de la fac, (les polys du SPR), et les cours en amphi, si je ne me trompe pas. Je ne connais que le DAPI, la fluorescéine et la rhodamine....

Mh, je ne suis pas sûr que ce soit écrit dans les polys, certes, mais je suis catégorique sur le fait que nombre de professeurs se sont étalés sur le GFP. C'est une protéine importante à connaître, au moins par culture générale (sait-on jamais, peut-être que le jour où tu tomberas sur un exo qui en parle, tu ne perdras pas de temps à comprendre ce que c'est).

Ah d'accord, l'énoncé demandait si on pouvait utiliser un microscope optique. Les microscopes optiques à fluorescences sont des microscopes optiques (mais l'inverse n'est pas vrai)... un peu ambigue non ?

On peut les voir, pas les observer. En fait, tu peux les apercevoir au MO, mais ça ne permettra pas de distinguer grand chose, la partie la plus discriminante de cette question étant "assez grands". Les plus gros éléments du cytosquelette font 25 nm, soit près de 10 fois plus petit que le grossissement maximal en MO.

[le.roi.singe]

Mh, je ne suis pas sûr que ce soit écrit dans les polys, certes, mais je suis catégorique sur le fait que nombre de professeurs se sont étalés sur le GFP. C'est une protéine importante à connaître, au moins par culture générale (sait-on jamais, peut-être que le jour où tu tomberas sur un exo qui en parle, tu ne perdras pas de temps à comprendre ce que c'est).

Merci pour la précision.
Qui en a parlé ? Je vais allé reviser le cours en question (en ED ou en amphi ? )

On peut les voir, pas les observer. En fait, tu peux les apercevoir au MO, mais ça ne permettra pas de distinguer grand chose, la partie la plus discriminante de cette question étant "assez grands". Les plus gros éléments du cytosquelette font 25 nm, soit près de 10 fois plus petit que le grossissement maximal en MO.

Je ne te suis pas, le corrigé dit pourtant qu'on peut les observer en microscope optique à fluorescence ? La résolution est la même, on peut "juste" mieux les voir étant donné qu'il y a de la fluorescence.

[✿ Mirumi ✿]

Mh, je ne suis pas sûr que ce soit écrit dans les polys, certes, mais je suis catégorique sur le fait que nombre de professeurs se sont étalés sur le GFP. C'est une protéine importante à connaître, au moins par culture générale (sait-on jamais, peut-être que le jour où tu tomberas sur un exo qui en parle, tu ne perdras pas de temps à comprendre ce que c'est).

Merci pour la précision.
Qui en a parlé ? Je vais allé reviser le cours en question (en ED ou en amphi ? )

On peut les voir, pas les observer. En fait, tu peux les apercevoir au MO, mais ça ne permettra pas de distinguer grand chose, la partie la plus discriminante de cette question étant "assez grands". Les plus gros éléments du cytosquelette font 25 nm, soit près de 10 fois plus petit que le grossissement maximal en MO.

Je ne te suis pas, le corrigé dit pourtant qu'on peut les observer en microscope optique à fluorescence ? La résolution est la même, on peut "juste" mieux les voir étant donné qu'il y a de la fluorescence.

Hello !

Tome I, Introduction au monde vivant, page 14 : On peut lire que la GFP est une protéine fluorescente et qu'on l'utilise dans la microscopie photonique &... à fluorescence (logique lol)!
On l'a également re-croisée lors du premier ED de biocell! Page 9, QCM N°9. Il est très probable qu'on en parle encore dans d'autres QCM puisqu'il s'agit d'un outil d'étude très commun

Sinon, je suis pas sûre d'avoir très bien suivie la deuxième partie de la question (je dois être fatiguée, qui sait ) mais euh...

La GFP est bien employée en immunocytochimie c'est-à-dire à l'aide d'un microscope photonique (= optique). En revanche, ce que tu vas observer avec la GFP c'est seulement une sorte de gros "tas" donc c'est comme si tu les voyais les éléments du cytosquelette en "longueur". Tu ne pourras pas observer l'assemblages des constituants des cytosquelettes puisque bah, c'est beaucoup trop petit pour ton microscope optique (par contre, possible avec le ME).
-> Tu ne peux pas voir les "élements" du cytosquelette. Tout ce que tu verras c'est le cytosquelette dans son ensemble! Ce qui est pas mal différent quand même

Est-ce que c'est plus clair?

[le.roi.singe]

(je dois être fatiguée, qui sait )

Mais voyons... il est à peine le matin...

Tome I, Introduction au monde vivant, page 14 : La GFP est une protéine fluorescente et on l'utilise dans la microscopie photonique &... à fluorescence (logique lol)!

Merci d'avoir pris le temps de chercher pour moi !
Mais pourquoi tu dis photonique à fluorescence ? Plutot optique à fluorescence non ?

On l'a également re-croisée lors du premier ED de biocell! Page 9, QCM N°9

Merci encore !

Est ce que le GFP fait parti de l'immunocytochimie ou immunofluorescence ? Car on a pas d'anticorps ici ?

[✿ Mirumi ✿]

Mais pourquoi tu dis photonique à fluorescence ? Plutot optique à fluorescence non ?

C'est la même chose, t'embêtes pas avec ça!
Par ailleurs, si ça peut aider pour plus tard, dis-toi qu'à chaque fois qu'on parle de coloration, c'est de la MO. On jouera plutôt sur les contrastes avec la ME
Il y a un joli schéma récapitulatif page 47 du poly d'ED (dans les annexes techniques)

(EDIT : Whoops j'avais pas vu la 2e partie de la question)

Est ce que le GFP fait parti de l'immunocytochimie ou immunofluorescence ? Car on a pas d'anticorps ici ?

La GFP fait effectivement bien partie de l'immunofluorescence!


Bon courage!

[le.roi.singe]

C'est la même chose, t'embêtes pas avec ça!
Par ailleurs, si ça peut aider pour plus tard, dis-toi qu'à chaque fois qu'on parle de coloration, c'est de la MO. On jouera plutôt sur les contrastes avec la ME

On est censé justement distinguer microscope optique et microscope électronique non ?
Justement, du dis que c'est de la MO, et au dessus, tu dis que c'est de la microscopie photonique.

Merci pour la page 47 !

[✿ Mirumi ✿]

On est censé justement distinguer microscope optique et microscope électronique non ?
Justement, du dis que c'est de la MO, et au dessus, tu dis que c'est de la microscopie photonique.

Heu, je sais pas quand est-ce que j'ai dit que ME = Microscopie photonique mais si c'est vraiment le cas, c'est une erreur de ma part

Mais en gros :
ME = Microscopie électronique à l'aide d'un microscope électronique
MO = Microscopie photonique à l'aide d'un microscope "optique" (on dit également photonique mais bon, c'est pour justifier le M"O" jpp)